【醫學百科●血液成分制備】

楊籍富

【醫學百科●血液成分制備】

 

濃縮紅細胞的制備可在全血有效保存期內的任何時間移出血漿，根據移出血漿量不同，紅細胞比容可為70％～90％，但以70％的紅細胞為佳，便于輸注。

 

制備方法離心法(1)用二聯塑料血袋采集全血。

 

(2)將血袋連同轉移袋一起，用塑料氣包或其他方法夾持血袋，使血袋上部在離心杯中鼓起，處于直立的位置。

 

(3)將平衡好的成對離心杯，準確地掛在離心機轉頭兩個對稱的位置上蓋好離心機內外蓋，5000g離心7min，溫度4℃±2℃，使紅細胞快速下沉。

 

如離心機性能有限，不可能達到以上離心力時，可根據情況，相應延長離心時間。

 

(4)將血袋放在血漿擠壓器兩夾板之間，去掉血袋與分漿管之間的堵頭，讓血漿流入轉移袋內。

 

(5)熱合封口，并切斷連接血袋和轉移袋之間的分漿管，血袋中留下部分即為濃縮紅細胞。

 

自然沉降法將血袋垂直吊掛于4℃±2℃冰箱內，使紅細胞自然下沉1～3d，或將血袋呈70°～80°角立于冰箱，需用時，用一次性分漿器分出血漿，制得濃縮紅細胞。

 

保存紅細胞比容不超過80％，其保存期同全血。

 

洗滌紅細胞的制備一般用生理鹽水反復洗滌3～6次。

 

經洗滌的紅細胞，除白細胞和血小板減少外，血漿蛋白也極少，紅細胞中殘存的血漿蛋白含量約為原總蛋白的1％以下。

 

制備方法手工洗滌法必須在無菌室的超凈臺上操作。

 

目前國家尚未生產統一的一次性洗滌器，故洗滌方法也不盡相同，在此僅介紹中國醫學科學院輸血研究所采用多節洗滌器(包括1個三通接頭和多個二通接頭與多條塑料管連接而成)的洗滌方法。

 

(1)用三聯塑料血袋采集全血。

 

(2)以1160g離心8min溫度20℃。

 

(3)分出上層血漿至2號轉移袋，將白膜層和白膜層下1.0～1.5cm厚的紅細胞移至1號轉移袋，血袋中留下濃縮紅細胞。

 

(4)將濃縮紅細胞袋與多節洗滌器三通接頭一端連接，1000ml或500ml袋，或500ml瓶生理鹽水和1000ml空塑料袋分別與三通接頭兩端連接。

 

(5)松開鹽水袋塑料管上的止血鉗，向血袋內灌入生理鹽水250-300ml。

 

(6)取下血袋，熱合封閉管口，充分混勻后再以5000g離心6min，溫度4℃±2℃。

 

(7)將血袋再次連接到多節洗滌器第2個二通接頭一端，松開空袋塑料管上的止血鉗，將洗滌液及剩余的白膜層盡量擠入塑料袋內。

 

(8)重復步驟(5)-(7)，反復洗滌紅細胞3～6次，至最后1次擠出洗滌液及剩余白膜后，再注入約等于紅細胞1/2的生理鹽水，配制約為70％比容的紅細胞懸液。

 

機器洗滌法即以血細胞分離機洗滌紅細胞，有條件時可采用。

 

保存紅細胞洗滌后，可暫放在4℃±2℃冰箱保存，最好在6h內輸用，保存不得超過24h。

 

代漿紅細胞的制備將全血離心并移除絕大部分(90％以上)血漿后，將代血漿(大多含羥乙基淀粉和葡萄糖)或晶體鹽保存液加入紅細胞內，代替移出的血漿，制成代漿紅細胞或晶體鹽紅細胞懸液。

 

制備方法1．用帶有代血漿保存液的三聯塑料袋采集全血。

 

2．4℃±2℃條件下，以5000g離心7min。

 

3．分出上層血漿移至空轉移袋。

 

4．再將另一轉移袋內代血漿保存液加入紅細胞內，其用量約等于原血漿。

 

5．將紅細胞與代血漿保存液充分混勻。

 

6．熱合封口并切斷分漿管，制成代漿紅細胞。

 

附如用單袋采血，離心分出卜層血漿后，可通過連接管灌入代血漿保存液。

 

制備的代漿紅細胞在24h內輸注。

 

保存保存期因代血漿保存液的種類而定，如代血漿大多數含有羥乙基淀粉和葡萄糖等，于4℃±2℃保存期為14-21d。

 

SAG(氯化鈉、腺嘌呤和葡萄糖)保存液和SAGS保存液(氯化鈉、腺嘌呤、葡萄糖和蔗糖)，添加到濃縮紅細胞中，其有效保存期分別為35d和42～49d。

 

去白細胞的紅細胞制備制備方法從全血或壓積紅細胞內去除白細胞的方法較多，其去除效果各不相同，但任何一種方法都不可能把白細胞全部除去。

 

一般認為去除70％以上即可避免因白細胞凝集所致的發熱反應。

 

離心法是一種簡單而較為有效的制備方法。

 

(1)正位離心法：①用三聯塑料袋采集全血。

 

②以1160g離心8min，溫度控制在20℃。

 

③分出上層血漿至2號轉移袋內。

 

④擠出白膜層及靠近白膜層1.0-1.5cm厚的紅細胞至1號轉移袋內。

 

⑤為提高白細胞除去率，可再將2號轉移袋內的血漿返回血袋。

 

⑥充分混勻后重復步驟②～④。

 

⑦以原血漿配制成70％比容的去白細胞的紅細胞。

 

(2)倒置離心法：①用特制三聯塑料袋采集全血。

 

②將血袋倒置(底部朝上)離心，離心速度、時間和溫度同正位離心法。

 

③將血袋放在倒置擠壓器上，夾住2號轉移袋通路，并打開1號袋通路，使血袋下部少含白細胞的紅細胞流入1號轉移袋，當白膜層離血袋下口約剩4cm時，適當減慢血流速度，以免形成旋渦而影響白細胞除去效果。

 

④當白膜層離血袋下口只有2cm時，夾住通向1號轉移袋通路，打開2號轉移袋通路，讓白膜流入2號轉移袋。

 

此時可用手指推擠白膜，盡量使更多的白膜擠入2號轉移袋內，直至連接管呈現粉紅色時，夾住通向2號轉移袋的塑料管。

 

⑤從擠壓板上取下血袋，將去除白細胞的紅細胞返回原血袋內。

 

⑥充分混勻后重復步驟②-④，以提高白細胞去除率。

 

⑦將血漿與紅細胞一起正位離心，從血袋分出部分血漿置于紅細胞袋內，配制成70％比容的去白細胞的紅細胞。

 

過濾法使血液通過特制過濾器，利用吸附或阻擋白細胞等原理，將白細胞除去，而制得去白細胞的紅細胞。

 

過濾法簡單、方便，效果又好，它將有效地代替其他方法。

 

(1)尼龍纖維過濾器：根據尼龍纖維在鈣離子存在下，能選擇性地吸附白細胞這一特性，使血液通過尼龍纖維過濾器，將白細胞吸附，而獲得去白細胞的紅細胞。

 

方法為：①用肝素抗凝采集全血1個單位，過濾前不要將此血冷卻。

 

②取出事先放入溫箱加溫至37℃的濾器，再用37℃鹽水灌注。

 

③將血袋和濾器連接，于1h內將血液進行過濾，即獲得紅細胞。

 

(2)棉花纖維過濾器：可用于保存期內任何抗凝血。

 

據文獻報道，接近貯存末期的血液去除白細胞的效果更好。

 

一般過濾后的血液可除去95％以上白細胞，并保留95％以上紅細胞。

 

(3)微聚物過濾器：全血以5000g離心7min后，置入4℃±2℃冰箱保存，于輸血前將血液通過1個孔徑為20-40μm的微聚物過濾器進行過濾。

 

(4)用帶有白細胞濾器的輸血器輸注濃縮紅細胞。

 

沉降法使用沉降劑，如大分子右旋糖酐(分子量為15萬～20萬)或羥乙基淀粉(分子量為30萬-40萬)或羧甲基淀粉鈉，促使紅細胞快速下沉，而白細胞仍保留在血漿中，分出上層富含白細胞、血小板血漿，下層即為去白細胞的紅細胞。

 

所得紅細胞可用生理鹽水配制70％比容的紅細胞懸液。

 

本法技術簡單，操作時間短，不需昂貴設備，效果好；

 

缺點是沉降劑分子量大，抗原性強，易引起變態反應。

 

若使用低分子或中分子右旋糖酐或羥乙基淀粉，則沉降效果差。

 

洗滌法用洗滌法制備洗滌紅細胞，以及解凍紅細胞也屬于去白細胞的紅細胞。

 

濃縮粒(白)細胞的制備制備方法臨床上輸注白細胞主要指粒細胞，其制備方法主要利用離心、過濾、沉淀等原理。

 

1．血細胞分離機單采粒細胞效果較好(制備方法見有關章節)。

 

2．沉降法單采粒細胞(1)將全血采入內含大分子羥乙基淀粉及抗凝劑的二聯血袋中。

 

(2)血袋垂直吊掛，靜置15min。

 

(3)分出上層富含白細胞、血小板血漿至轉移袋。

 

(4)以1220g離心5min，使白細胞下沉而血小板仍保留在上層血漿中。

 

(5)將上層的富血小板血漿分至紅細胞袋內，回輸給獻血者，留下的即為濃縮粒(白)細胞。

 

如上反復循環4次，加工血液1600ml，同時并用皮質類固醇激素動員，可從1個獻血者獲得1×1010個以上的粒細胞，供患者1次輸注。

 

此法特別適用于嬰兒，因只需要1袋濃縮粒細胞(400ml血液)即可提供足夠的量。

 

3．離心擠白膜法(1)用三聯塑料血袋采集全血。

 

(2)以1160g離心8min，溫度20℃。

 

(3)分出上層血漿至2號轉移袋，留下約15～20ml血漿。

 

(4)將剩余血漿連同白膜層及靠近白膜層下1.5-2.0cm厚的紅細胞一起擠入1號轉移袋，即為濃縮白(粒)細胞。

 

總量為35～45ml，可獲得全血中60％以上的粒(白)細胞，其總數約為1×109個。

 

本法的缺點是：①粒(白)細胞制得率及總數偏低。

 

②每次輸注多個獻血者粒(白)細胞，易產生白細胞凝集素及HLA抗體，影響治療效果或出現輸血不良反應。

 

③本制品含有較多的淋巴細胞，可能導致移植物抗宿主病。

 

保存一般采用室溫(22℃±2℃)、不搖蕩的方法保存濃縮粒(白)細胞，時間不超過8h。

 

因此，粒(白)細胞制備后應盡快輸注，以免影響療效。

 

富含血小板血漿的制備血小板是3種血細胞中最小、最輕的一種，比重約為1.032。

 

由于血小板比白細胞容易從全血中分離出來，因此血小板的輸注開展較早。

 

分離方法可以從1袋全血中提取，也可用血細胞分離機從單個獻血者采集較大量的血小板，供給臨床輸注。

 

離心法：是國內目前制備富含血小板制品的主要方法。

 

(1)二聯塑料血袋采集全血。

 

(2)于4～6h內使用離心(1220g離心5min)，溫度為22℃±2℃，使紅細胞、白細胞基本下沉，而血小板因比重較輕，大部分仍保留在血漿中。

 

(3)分出上層血漿至轉移袋，此制品即為富含血小板血漿，約可獲得全血中70％以上的血小板。

 

濃縮血小板的制備制備方法1．三聯塑料血袋采集全血，按上述方法制備富含血小板血漿。

 

2．將富含血小板血漿離心(4650g離心6min或2980g離心20min)，溫度22℃±2℃，使血小板下沉。

 

3．分出上層少血小板血漿，留下20～30ml血漿于血小板中，即為濃縮血小板，約可獲得全血中60％以上的血小板。

 

4．由于2次離心，制備的濃縮血小板中血小板聚集成團，必須先放在22℃±2℃環境下靜置1-2h，待其自然解聚后，輕輕搖動血袋，使其成均勻混懸液后方可輸注。

 

制備時注意點1．采血順利，無凝塊。

 

2．從全血采出到制備全過程，包括離心溫度，均要求在22℃ 2℃環境中進行。

 

即使不立即制備，也不要將全血放入冰箱。

 

3．制備時動作一定要輕，避免較強的物理刺激，而造成血小板不可逆性聚集，影響輸注效果。

 

4．影響血小板得率的關鍵是第1次離心條件，包括離心速度和時間。

 

各單位可根據所使用離心機的性能，選用最佳離心條件。

 

5．嚴格無菌操作，因在室溫保存血小板，此點更為重要。

 

6．避免過多的白細胞、紅細胞，特別是白細胞的污染，因混入大量的紅、白細胞，可使血小板保存期間pH下降，更嚴重的是可使患者產生白細胞凝集素或HLA抗體，影響血小板治療效果，故對血小板制品中的白細胞污染量應嚴加控制。

 

7．肉眼觀察應無凝集現象。

 

保存以22℃±2℃振蕩保存為佳。

 

天津醫用高分子廠生產的塑料袋可保存3d，但需增加血漿量至50-70ml。

 

一般塑料袋只能保存24h。

 

適合血小板保存的pH為6.0～7.4。

 

新鮮液體血漿的制備新鮮液體血漿含有全部凝血因子，包括第V和第Ⅷ因子，適合于沒有條件冰凍保存血漿的醫療單位。

 

制備方法1．用三聯塑料血袋采集全血(要求采血順利)。

 

2．于采血后6h內以5000g離心7min分離出上層血漿。

 

3．再將血漿以5000g離心5min，并分出血漿，以除去血漿中殘留的細胞成分。

 

4．制備濃縮血小板時所獲得的少血小板血漿，也同樣可作為新鮮液體血漿使用。

 

新鮮冰凍血漿的制備制備方法同新鮮液體血漿含有全部凝血因子。

 

制備方法1．按制備新鮮液體血漿的方法制備血漿。

 

2．立即將新鮮液體血漿置于-30℃以下低溫冰箱或于冰乙醇浴中速凍后再轉入低溫冰箱貯存。

 

操作后管理保存新鮮冰凍血漿在-30℃以下保存，有效期為1年。

 

普通液體血漿的制備普通液體血漿含有穩定的凝血因子及白蛋白、球蛋白。

 

制備方法1．全血采集后4℃±2℃冰箱保存。

 

2．全血在保存期間或過期5d內自然沉降或離心后分出上層血漿，即為普通液體血漿。

 

保存普通液體血漿于4℃±2℃冰箱暫時保存，但必須于24h內輸用。

 

由于制備方法是非密閉性的，有可能發生細菌污染，故4℃±2℃冰箱保存，仍可能有嗜冷細菌生長。

 

普通冰凍血漿的制備普通冰凍血漿含有穩定的凝血因子及白蛋白、球蛋白。

 

制備方法1．按上法制備普通液體血漿。

 

2．立即置-30℃以下低溫冰箱。

 

3．新鮮冰凍血漿保存期滿1年后，可改為普通冰凍血漿。

 

4．制備冷沉淀所得的少冷沉淀血漿，也可繼續置于-30℃低溫冰箱保存，作為普通冰凍血漿使用。

 

保存自采血日起保存期限為5年。

 

冷沉淀的制備冷沉淀主要含有第Ⅷ因子、纖維蛋白原(第1因子)以及纖維結合蛋白等成分。

 

制備方法1．用四聯塑料血袋采集全血。

 

2．按制備新鮮冰凍血漿的方法制備血漿。

 

3．制備冷沉淀前將新鮮冰凍血漿置于4℃±2℃冰箱(約14h)或冰水中融化。

 

4．待其基本融化，仍留有少量小冰塊時進行離心(5000g離心10min)，溫度控制在4℃±2℃，使冷沉淀下沉。

 

5．盡快分出上層少冷沉淀血漿，留下約15-25ml血漿于冷沉淀中。

 

6．可繼續置于-30℃以下低溫冰箱保存備用，或以37℃水浴中輕輕搖動融化后立即供臨床輸注。

 

7．臨床輸用冷沉淀前，將多袋冷沉淀融化后，揉搓袋壁，使冷沉淀分散到15～25ml血漿中；

 

在無菌條件下，用一次性注射器把每個袋的內容物混合到一個袋中，最后用20-30ml生理鹽水沖洗各袋；

 

將此沖洗后的冷沉淀生理鹽水混懸液注入到最終混合的冷沉淀袋中，熱合封口，即可輸注。

 

注意事項第Ⅷ因子是一種很容易喪失活性的凝血因子，為了獲得高活性的第Ⅷ因子，以取得最大療效，在制備冷沉淀過程中應注意以下事項：1．要求采血順利，200～400ml采血時血液應在3-6min內采完，無凝塊。

 

2．采用兩次離心分離血漿，除去新鮮血漿中殘留的細胞成分；

 

因血漿冰凍時可使細胞破裂，釋放凝血活性物質，影響第Ⅷ因子穩定性。

 

3．新鮮血漿從開始冰凍起在1h內應變成固態，溫度可維持在-65℃以下，或風冷式冰箱和機械冰箱或干冰浴中(95％乙醇和碎干冰浴中，可在15min內完成冰凍)。

 

血漿袋在浸泡液體之前應用塑料套包裝好，保持其袋管干燥。

 

4．每400ml全血制備的冷沉淀，要求第Ⅷ因子含量在80U以上，纖維蛋白原含量在220mg以上。

 

保存于-30℃以下低溫冰箱保存，保存期自采血日起為1年。

 

引用：http://big5.wiki8.com/xueyechengfenzhibei_103883/